Regulation of oxidative stress by ATM is required for self-renewal of haematopoietic stem cells.
Nature. 2004 Oct 21;431(7011):997-1002.
PMID: 15496926
ATM とtelomerase RNA component (Terc) のdouble KOマウスで神経幹細胞の異常が観察される一方、ATM KOだけでは神経幹細胞に影響はみられないことが知られていた。
著者達は、ATMの幹細胞に対する役割を調べるために、ATMが欠損した場合の造血系に対する影響を詳細に調べた。その結果、ATMがROS (reactive oxygen species)の制御に関与し、造血幹細胞の「自己再生」に対して重要な役割を担っていることが明らかになった。「自己再生」というのがポイントで、ATMは造血幹細胞(progenitor)の初期形成の増殖や分化には関与していないということらしい。言い換えると、ATMが機能しなくても造血幹細胞は一度は作られるとのこと。
論文中で明らかになった、具体的な経路は以下のとうり。
ATM ---I ROS → p16INK4a → Rb family ---I 造血幹細胞の自己再生
(---I 抑制, → 促進)
＜今回の論文の柱となる実験方法について＞
造血幹細胞を調べるためには以下のような方法で、多分化能と自己複製能を合わせ持つことを示すことが必要(がん幹細胞の重要性も最近わかってきたが、造血幹細胞のように確立された評価方法がまだはっきりとしていない。がん幹細胞の評価方法は今後の研究課題の一つとして残っている。)。
造血幹細胞の回収：c-Kit+ Sca-1+ Lineage- (KSL) cells
マウス骨髄細胞では、c-Kit 抗原陽性、Sca-1抗原陽性、Lineage抗原陰性(血液細胞の各種分化抗原が陰性)の分画に造血幹細胞が濃縮されている。さらに、このKSLに、CD34抗原陰性/弱陽性(low)、Thy1抗原陰性/弱陽性、Tie2抗原陽性などを組み合わせることにより造血幹細胞を高度に純化することができる(今回の論文では、CD34-/lowKSL, Thy1lowKSL, Tie2+KSL)。また、Hoechst33342色素で染色されないSP (Side Population) 分画にも造血幹細胞が濃縮されていることが知られている。
in vitro：コロニーアッセイ法
サイトカインを含む分化誘導培地に粘性のメチルセルロースを加えて細胞を培養し、造血幹細胞を含む造血前駆細胞が増殖、分化して形成するコロニーを観察する。短期間で結果が得られるが、造血幹細胞であるということは必ずしも言えない。
in vivo：骨髄移植法(競合的骨髄再構築法)
造血幹細胞を、致死量の放射線を照射して造血能を失わせたレシピエントマウスに移植すると、レシピエントマウスの造血系が長期に渡って再構築される。競合的骨髄再構築法は、調べたいテスト細胞と、ある一定の骨髄細胞(競合細胞)を同時に放射線照射したマウスに移植する方法である。これにより、テスト細胞中にレシピエントマウスの短期間の生存に必要な前駆細胞や長期生存に必要な造血幹細胞が存在しなくてもレシピエントマウスの生存が保障される。また、血液中のテスト細胞と競合細胞の割合を調べることにより、キメリズム、造血幹細胞活性、造血幹細胞数などの数値を得ることができる。Ly5(表面抗原マーカー)コンジェニックマウスを使うことで、テスト細胞と競合細胞を区別することができる。例えば、テスト細胞Ly5.2 競合細胞Ly5.1を、それぞれを認識する抗体を使って区別する。造血幹細胞を検出するための信頼できる方法であるが、数カ月の期間を要する。
Nature. 2004 Oct 21;431(7011):997-1002.
PMID: 15496926
ATM とtelomerase RNA component (Terc) のdouble KOマウスで神経幹細胞の異常が観察される一方、ATM KOだけでは神経幹細胞に影響はみられないことが知られていた。
著者達は、ATMの幹細胞に対する役割を調べるために、ATMが欠損した場合の造血系に対する影響を詳細に調べた。その結果、ATMがROS (reactive oxygen species)の制御に関与し、造血幹細胞の「自己再生」に対して重要な役割を担っていることが明らかになった。「自己再生」というのがポイントで、ATMは造血幹細胞(progenitor)の初期形成の増殖や分化には関与していないということらしい。言い換えると、ATMが機能しなくても造血幹細胞は一度は作られるとのこと。
論文中で明らかになった、具体的な経路は以下のとうり。
ATM ---I ROS → p16INK4a → Rb family ---I 造血幹細胞の自己再生
(---I 抑制, → 促進)
＜今回の論文の柱となる実験方法について＞
造血幹細胞を調べるためには以下のような方法で、多分化能と自己複製能を合わせ持つことを示すことが必要(がん幹細胞の重要性も最近わかってきたが、造血幹細胞のように確立された評価方法がまだはっきりとしていない。がん幹細胞の評価方法は今後の研究課題の一つとして残っている。)。
造血幹細胞の回収：c-Kit+ Sca-1+ Lineage- (KSL) cells
マウス骨髄細胞では、c-Kit 抗原陽性、Sca-1抗原陽性、Lineage抗原陰性(血液細胞の各種分化抗原が陰性)の分画に造血幹細胞が濃縮されている。さらに、このKSLに、CD34抗原陰性/弱陽性(low)、Thy1抗原陰性/弱陽性、Tie2抗原陽性などを組み合わせることにより造血幹細胞を高度に純化することができる(今回の論文では、CD34-/lowKSL, Thy1lowKSL, Tie2+KSL)。また、Hoechst33342色素で染色されないSP (Side Population) 分画にも造血幹細胞が濃縮されていることが知られている。
in vitro：コロニーアッセイ法
サイトカインを含む分化誘導培地に粘性のメチルセルロースを加えて細胞を培養し、造血幹細胞を含む造血前駆細胞が増殖、分化して形成するコロニーを観察する。短期間で結果が得られるが、造血幹細胞であるということは必ずしも言えない。
in vivo：骨髄移植法(競合的骨髄再構築法)
造血幹細胞を、致死量の放射線を照射して造血能を失わせたレシピエントマウスに移植すると、レシピエントマウスの造血系が長期に渡って再構築される。競合的骨髄再構築法は、調べたいテスト細胞と、ある一定の骨髄細胞(競合細胞)を同時に放射線照射したマウスに移植する方法である。これにより、テスト細胞中にレシピエントマウスの短期間の生存に必要な前駆細胞や長期生存に必要な造血幹細胞が存在しなくてもレシピエントマウスの生存が保障される。また、血液中のテスト細胞と競合細胞の割合を調べることにより、キメリズム、造血幹細胞活性、造血幹細胞数などの数値を得ることができる。Ly5(表面抗原マーカー)コンジェニックマウスを使うことで、テスト細胞と競合細胞を区別することができる。例えば、テスト細胞Ly5.2 競合細胞Ly5.1を、それぞれを認識する抗体を使って区別する。造血幹細胞を検出するための信頼できる方法であるが、数カ月の期間を要する。
curious 知りたがる 好奇心の強い
nosy 詮索好きな 詮索好きな人
goofy とんまな おろかな ばかな
crappy くだらない
shabby 使い古した ボロボロの
nosy 詮索好きな 詮索好きな人
goofy とんまな おろかな ばかな
crappy くだらない
shabby 使い古した ボロボロの
Establishment of a detection system for demethylating agents using an endogenous promoter CpG island.
Mutat Res. 2004 Dec 21;568(2):187-94.
PMID: 15542106
著者達は本論文で、内在性promoter CpG islandの脱メチル化を検出するための実験系を構築したことを報告している。これまで、promoter CpG island領域とレポーター遺伝子を持つplasmid を細胞内に導入して脱メチル化を検出する実験系の報告はあったが、細胞内では外から導入したpromoter 領域のメチル化の状態は不安定なことが知られていた。
そこで著者達は、細胞内の内在性promoter CpG island (メチル化の状態)の下流に相同遺伝子組換えでEGFPレポーターplasmidを導入することによりこの問題を解決し、脱メチル化剤 (5-aza-dC) 投与でEGFPレポーター遺伝子の発現が誘導される安定した細胞株の樹立に成功している。
実験にはcolon cancer 由来のHCT116細胞株を用いている。この細胞株は体細胞由来にもかかわらず相同遺伝子組換え頻度が高く、遺伝子破壊実験の必要な研究によく利用される。また、胃がんと乳がんで発現が低下する10種類の遺伝子についてHCT116細胞で調べ、その中でFLJ32130遺伝子(機能についてはまだよくわかっていない)のpromoter CpG islandを選び今回の実験に利用している。
ちなみに、メチル化の誘導をレポーター遺伝子などで検出できる実験系はまだ存在しないらしい。
Mutat Res. 2004 Dec 21;568(2):187-94.
PMID: 15542106
著者達は本論文で、内在性promoter CpG islandの脱メチル化を検出するための実験系を構築したことを報告している。これまで、promoter CpG island領域とレポーター遺伝子を持つplasmid を細胞内に導入して脱メチル化を検出する実験系の報告はあったが、細胞内では外から導入したpromoter 領域のメチル化の状態は不安定なことが知られていた。
そこで著者達は、細胞内の内在性promoter CpG island (メチル化の状態)の下流に相同遺伝子組換えでEGFPレポーターplasmidを導入することによりこの問題を解決し、脱メチル化剤 (5-aza-dC) 投与でEGFPレポーター遺伝子の発現が誘導される安定した細胞株の樹立に成功している。
実験にはcolon cancer 由来のHCT116細胞株を用いている。この細胞株は体細胞由来にもかかわらず相同遺伝子組換え頻度が高く、遺伝子破壊実験の必要な研究によく利用される。また、胃がんと乳がんで発現が低下する10種類の遺伝子についてHCT116細胞で調べ、その中でFLJ32130遺伝子(機能についてはまだよくわかっていない)のpromoter CpG islandを選び今回の実験に利用している。
ちなみに、メチル化の誘導をレポーター遺伝子などで検出できる実験系はまだ存在しないらしい。
What's up? (= What’s going on?) 「元気？」
What's up?の返事に数ヶ月もの間困っていた。
GoodとかFineでごまかしていたが、どうやら違っていたことが判明。
How are you?の返事にGoodやFine は使えるが、
What's up?の答え方として間違いとのこと。
ちなみにWhat's up?は親しい間柄で使う方が無難(？)で、How are you? の方が丁寧。
返事としてはこんな感じか。。。
“What's up?” “Nothing much.” 「元気？」「うん」
この“Nothing much.”が返事にあうらしく、
さらに、Nothing much. I just came back from lunch.
とかの文を加えてもいいと友達が教えてくれた。
What's up?の返事に数ヶ月もの間困っていた。
GoodとかFineでごまかしていたが、どうやら違っていたことが判明。
How are you?の返事にGoodやFine は使えるが、
What's up?の答え方として間違いとのこと。
ちなみにWhat's up?は親しい間柄で使う方が無難(？)で、How are you? の方が丁寧。
返事としてはこんな感じか。。。
“What's up?” “Nothing much.” 「元気？」「うん」
この“Nothing much.”が返事にあうらしく、
さらに、Nothing much. I just came back from lunch.
とかの文を加えてもいいと友達が教えてくれた。
今日、インターネット経由で買い物をした。
PDFファイルを買うという特殊な形式。
諭吉さんがひとり飛んで行ってしまった。
(あとから冷静に考えるとかなり危険な買い物だったなと。。。)
幸いPDFファイルの内容にも満足できたけど、別の意味でいい勉強に。
軽く見積もって100-1000人が購入していると考えても凄い額。
広告方法などで書籍とは別の戦略が必要だと思うが、
出版社を介さない分、個人の手元に入る率は良さそう。
メルマガに続く新しい形態かも。
PDFファイルを買うという特殊な形式。
諭吉さんがひとり飛んで行ってしまった。
(あとから冷静に考えるとかなり危険な買い物だったなと。。。)
幸いPDFファイルの内容にも満足できたけど、別の意味でいい勉強に。
軽く見積もって100-1000人が購入していると考えても凄い額。
広告方法などで書籍とは別の戦略が必要だと思うが、
出版社を介さない分、個人の手元に入る率は良さそう。
メルマガに続く新しい形態かも。
out of the loop 蚊帳｛かや｝の外に置かれて、中枢から外れて、事情に疎くて
友達が噂話を知らなかったときに、その理由として聞いた表現。
「I am out of the loop.」
友達が噂話を知らなかったときに、その理由として聞いた表現。
「I am out of the loop.」
Species- and cell type-specific requirements for cellular transformation.
Cancer Cell. 2004 Aug;6(2):171-83.
PMID: 15324700
著者達はまだ体系的に理解されていなかったマウス細胞とヒト細胞のトランスフォーメイションの違いについて可能な限り条件をそろえた比較検討を以下の方法で行なった。
・マウス皮膚腺維芽細胞とヒト皮膚腺維芽細胞を主に使用 (どちらも新生児由来)。
・TERT (Telomerase reverse transcriptase) による細胞の不死化を増殖曲線とSA-beta-galactosidase 染色で検討。
・Rasのmutants 遺伝子 (Ras 経路を活性化) やSV40のLarge T (LT) とSmall T (ST) antigen 遺伝子を導入 (LT や LT の mutants で p53 と pRb の経路を抑制：ST はPP2A (Protein phosphatase 2A) を抑制) によってトランスフォームさせる。
・トランスフォーメイションについては軟寒天培養とヌードマウスへの移植によって解析。
不死化することがトランスフォーメイションへの第一段階である。そこでまず始めに継代を繰り返してマウス・ヒト両腺維芽細胞の増殖能をそれぞれ検討した。マウス細胞は容易に不死化するが、Hayflick の結果と同様、ヒト細胞は 50 回分裂する辺りで細胞老化の表現型を示した。TERT と不死化との関係を調べたところ、マウス細胞では TERT 非依存的に不死化するのに対しヒト細胞では TERT 依存的に不死化した。さらに、著者達は SV40- LT, ST, そして Ras の mutant 遺伝子などを導入していき、その結果、マウス腺維芽細胞とヒト腺維芽細胞ではトランスフォーメイションに必要な経路に違いが見られ、以下に示すようにマウスでは 2つの変化が必要なのに対しヒトでは 6つの変化が必要であることを示した。
・マウス：p53 (or pRb), Raf
・ヒト：p53, pRb, telomerase, PP2A, Raf, Ral-GEF (Guanine nucleotide exchange factor)
またヒト胎児腎細胞とヒト乳腺上皮細胞についても同様の実験を行い、ヒト腺維芽細胞の「Raf と Ral-GEF」の部分が「PI3K と Ral-GEF」 そして「Raf, PI3K, Ral-GEF」にそれぞれ置き換わることも報告している。Raf, PI3K, Ral-GEF は Ras 経路を代表するものであり、このことはRas 経路が組織特異的ながんの発生に関与していることを示唆している。
Cancer Cell. 2004 Aug;6(2):171-83.
PMID: 15324700
著者達はまだ体系的に理解されていなかったマウス細胞とヒト細胞のトランスフォーメイションの違いについて可能な限り条件をそろえた比較検討を以下の方法で行なった。
・マウス皮膚腺維芽細胞とヒト皮膚腺維芽細胞を主に使用 (どちらも新生児由来)。
・TERT (Telomerase reverse transcriptase) による細胞の不死化を増殖曲線とSA-beta-galactosidase 染色で検討。
・Rasのmutants 遺伝子 (Ras 経路を活性化) やSV40のLarge T (LT) とSmall T (ST) antigen 遺伝子を導入 (LT や LT の mutants で p53 と pRb の経路を抑制：ST はPP2A (Protein phosphatase 2A) を抑制) によってトランスフォームさせる。
・トランスフォーメイションについては軟寒天培養とヌードマウスへの移植によって解析。
不死化することがトランスフォーメイションへの第一段階である。そこでまず始めに継代を繰り返してマウス・ヒト両腺維芽細胞の増殖能をそれぞれ検討した。マウス細胞は容易に不死化するが、Hayflick の結果と同様、ヒト細胞は 50 回分裂する辺りで細胞老化の表現型を示した。TERT と不死化との関係を調べたところ、マウス細胞では TERT 非依存的に不死化するのに対しヒト細胞では TERT 依存的に不死化した。さらに、著者達は SV40- LT, ST, そして Ras の mutant 遺伝子などを導入していき、その結果、マウス腺維芽細胞とヒト腺維芽細胞ではトランスフォーメイションに必要な経路に違いが見られ、以下に示すようにマウスでは 2つの変化が必要なのに対しヒトでは 6つの変化が必要であることを示した。
・マウス：p53 (or pRb), Raf
・ヒト：p53, pRb, telomerase, PP2A, Raf, Ral-GEF (Guanine nucleotide exchange factor)
またヒト胎児腎細胞とヒト乳腺上皮細胞についても同様の実験を行い、ヒト腺維芽細胞の「Raf と Ral-GEF」の部分が「PI3K と Ral-GEF」 そして「Raf, PI3K, Ral-GEF」にそれぞれ置き換わることも報告している。Raf, PI3K, Ral-GEF は Ras 経路を代表するものであり、このことはRas 経路が組織特異的ながんの発生に関与していることを示唆している。
shark 鮫、どん欲に他人を食いものにする人
ex) pool shark, dart shark
ビリーヤードなどでお金を稼ぐ人。
(下手なふりして、掛け金を上げる作戦など。。。)
お金は掛けていないが、以前、
「You are a dart shark. 」と言われた(お金が絡んでなくても使えるみたい)。
誉め言葉なのかどうかはわからない。。。
ex) pool shark, dart shark
ビリーヤードなどでお金を稼ぐ人。
(下手なふりして、掛け金を上げる作戦など。。。)
お金は掛けていないが、以前、
「You are a dart shark. 」と言われた(お金が絡んでなくても使えるみたい)。
誉め言葉なのかどうかはわからない。。。
元ボスの教え
この業界の収入に関する話がでた時のこと。
普通に生活する分には困らないが、お金持ちにはなれないと。。。
その分、仕事を趣味と考えて、その趣味に膨大なお金をかけて楽しむことができれば幸せということだった。確かに。
今、仕事で使える金額は、恵まれているのだろうか？
(仕事の内容が限定され過ぎていて今一つ実感が湧かない。。。)
いつか異動の話があればこの言葉を思い出して判断基準の一つにしよう。
アメリカでこれだけは何とかして欲しいもの
1. 仕事で使う試料チューブを保存する9x9の箱。何故、10x10ではないのか？
2. CDやDVDのケースに貼ってある防犯用(?)のテープの粘着力。テープの糊がケースに付着。
この業界の収入に関する話がでた時のこと。
普通に生活する分には困らないが、お金持ちにはなれないと。。。
その分、仕事を趣味と考えて、その趣味に膨大なお金をかけて楽しむことができれば幸せということだった。確かに。
今、仕事で使える金額は、恵まれているのだろうか？
(仕事の内容が限定され過ぎていて今一つ実感が湧かない。。。)
いつか異動の話があればこの言葉を思い出して判断基準の一つにしよう。
アメリカでこれだけは何とかして欲しいもの
1. 仕事で使う試料チューブを保存する9x9の箱。何故、10x10ではないのか？
2. CDやDVDのケースに貼ってある防犯用(?)のテープの粘着力。テープの糊がケースに付着。
hyperemia 充血
tentative 試験的な、仮の
drawer 引き出し、たんす
courtesy 礼儀正しいこと
hands-off approach 傍観主義的なアプローチ
booze 酒、酒宴、ビール、アルコール飲料
うーん、何かが違う。。。
これで暗記の助けになるのか？
tentative 試験的な、仮の
drawer 引き出し、たんす
courtesy 礼儀正しいこと
hands-off approach 傍観主義的なアプローチ
booze 酒、酒宴、ビール、アルコール飲料
うーん、何かが違う。。。
これで暗記の助けになるのか？
